分 離 純 化

檢碩科學器材（上海）有限(xian)公司(si)

含有(you)一種(zhong)以上的(de)微生物培(pei)養物稱為(wei)(wei)混和培(pei)養物（mixed culture）。如果(guo)在一個菌落中所有(you)細(xi)胞均(jun)來(lai)自(zi)于一個親代細(xi)胞，那么(me)這個菌落稱為(wei)(wei)純(chun)(chun)(chun)培(pei)養（pureculture）。在進行菌種(zhong)鑒定(ding)時(shi)，所用的(de)微生物一般均(jun)要求為(wei)(wei)純(chun)(chun)(chun)的(de)培(pei)養物。得到純(chun)(chun)(chun)培(pei)養的(de)過程稱為(wei)(wei)分離純(chun)(chun)(chun)化，方法(fa)有(you)許(xu)多(duo)種(zhong)。

１、傾注平板法

首先把(ba)微生物懸液通過(guo)一(yi)系列稀釋(shi)(shi)，取(qu)(qu)一(yi)定(ding)量(liang)的(de)稀釋(shi)(shi)液與熔化(hua)好的(de)保(bao)持在(zai)40-50°左右的(de)營養(yang)(yang)(yang)瓊脂培養(yang)(yang)(yang)基充分(fen)混(hun)合(he)，然后(hou)把(ba)這混(hun)合(he)液傾注到(dao)無(wu)菌的(de)培養(yang)(yang)(yang)皿中(zhong)，待凝固之后(hou)，把(ba)這平(ping)板倒(dao)置在(zai)恒箱中(zhong)培養(yang)(yang)(yang)。單一(yi)細胞(bao)經(jing)過(guo)多(duo)次(ci)增殖后(hou)形(xing)成一(yi)個(ge)菌落，取(qu)(qu)單個(ge)菌落制成懸液，重(zhong)復上(shang)述步驟(zou)數次(ci)，便可(ke)得到(dao)純培養(yang)(yang)(yang)物。

２、涂布平板法

首先把微生物懸液通過(guo)適(shi)當的(de)(de)稀釋(shi)(shi)(shi)，取一定量的(de)(de)稀釋(shi)(shi)(shi)液放在(zai)無菌的(de)(de)已經凝固(gu)的(de)(de)營養(yang)瓊脂(zhi)平板上(shang)，然后用(yong)無菌的(de)(de)玻璃刮刀把稀釋(shi)(shi)(shi)液均勻地(di)涂布在(zai)培養(yang)基表面上(shang)，經恒溫培養(yang)便可(ke)以(yi)得到單個菌落(luo)。

３、平板劃線法

簡(jian)單的(de)(de)(de)(de)分離微生(sheng)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)是平板劃(hua)(hua)線法(fa)(fa)(fa)(fa)。用(yong)無菌的(de)(de)(de)(de)接種環(huan)(huan)取培養物(wu)(wu)少許在(zai)(zai)平板上(shang)(shang)進行劃(hua)(hua)線。劃(hua)(hua)線的(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)很多，常見的(de)(de)(de)(de)比較容易出現(xian)單個(ge)菌落(luo)的(de)(de)(de)(de)劃(hua)(hua)線方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)(fa)有斜(xie)線法(fa)(fa)(fa)(fa)、曲(qu)線法(fa)(fa)(fa)(fa)、方(fang)(fang)格(ge)(ge)法(fa)(fa)(fa)(fa)、放(fang)射法(fa)(fa)(fa)(fa)、四(si)格(ge)(ge)法(fa)(fa)(fa)(fa)等。當接種環(huan)(huan)在(zai)(zai)培養基(ji)表(biao)面上(shang)(shang)往(wang)后(hou)移動(dong)時，接種環(huan)(huan)上(shang)(shang)的(de)(de)(de)(de)菌液逐漸稀釋，最(zui)后(hou)在(zai)(zai)所劃(hua)(hua)的(de)(de)(de)(de)線上(shang)(shang)分散著單個(ge)細(xi)胞(bao)，經培養，每一(yi)個(ge)細(xi)胞(bao)長成一(yi)個(ge)菌落(luo)。

４、富集培養法

富(fu)集(ji)培養法(fa)的(de)方(fang)(fang)法(fa)和原理非常(chang)簡單。我們可以(yi)創造(zao)一些(xie)(xie)條件只讓所需的(de)微生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)生(sheng)(sheng)長，在(zai)(zai)這些(xie)(xie)條件下(xia)，所需要(yao)的(de)微生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)能有(you)效地與(yu)其(qi)他(ta)微生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)進(jin)行競爭，在(zai)(zai)生(sheng)(sheng)長能力方(fang)(fang)面遠遠超過其(qi)他(ta)微生(sheng)(sheng)物(wu)(wu)。如(ru)果要(yao)分(fen)離一些(xie)(xie)專性寄(ji)生(sheng)(sheng)菌(jun)，就必須把樣(yang)品接種到(dao)相(xiang)應敏(min)感宿(su)主細(xi)胞群體中，使其(qi)大量生(sheng)(sheng)長。通過多(duo)次重(zhong)復(fu)移種便可以(yi)得到(dao)純的(de)寄(ji)生(sheng)(sheng)菌(jun)。

５、厭氧法

在實驗室(shi)中，為(wei)了分(fen)離(li)(li)某(mou)些(xie)厭(yan)氧(yang)菌(jun)，可以利(li)用裝(zhuang)有原培(pei)養(yang)基(ji)(ji)的(de)(de)試(shi)(shi)管作為(wei)培(pei)養(yang)容器，把這支試(shi)(shi)管放在沸水浴中加(jia)熱數分(fen)鐘，以便逐出培(pei)養(yang)基(ji)(ji)中的(de)(de)溶解氧(yang)。然(ran)后(hou)(hou)快(kuai)速冷卻，并進行接(jie)種(zhong)。接(jie)種(zhong)后(hou)(hou)，加(jia)入(ru)無菌(jun)的(de)(de)石(shi)蠟于培(pei)養(yang)基(ji)(ji)表(biao)面(mian)，使培(pei)養(yang)基(ji)(ji)與空氣隔絕。另一種(zhong)方法是，在接(jie)種(zhong)后(hou)(hou)，利(li)用N2或CO2取代培(pei)養(yang)基(ji)(ji)中的(de)(de)氣體，然(ran)后(hou)(hou)在火焰上把試(shi)(shi)管口密(mi)封。有時為(wei)了更有效地分(fen)離(li)(li)某(mou)些(xie)厭(yan)氧(yang)菌(jun)，可以把所分(fen)離(li)(li)的(de)(de)樣品接(jie)種(zhong)于培(pei)養(yang)基(ji)(ji)上，然(ran)后(hou)(hou)再把培(pei)養(yang)皿放在*密(mi)封的(de)(de)厭(yan)氧(yang)培(pei)養(yang)裝(zhuang)置中。

6、單細胞（或單孢子）分離法

是(shi)采取顯(xian)微(wei)分離(li)(li)法從(cong)混雜群(qun)體(ti)中直接分離(li)(li)單(dan)個(ge)(ge)(ge)細胞(bao)或單(dan)個(ge)(ge)(ge)個(ge)(ge)(ge)體(ti)進行培(pei)養以獲得純培(pei)養。較(jiao)(jiao)(jiao)大的(de)微(wei)生物(wu)，可采用(yong)毛細管提取單(dan)個(ge)(ge)(ge)個(ge)(ge)(ge)體(ti)。個(ge)(ge)(ge)體(ti)相對(dui)較(jiao)(jiao)(jiao)小的(de)微(wei)生物(wu)，需采用(yong)顯(xian)微(wei)操作儀，在顯(xian)微(wei)鏡下用(yong)毛細管或顯(xian)微(wei)針、鉤、環等挑取單(dan)個(ge)(ge)(ge)微(wei)生物(wu)細胞(bao)或孢子(zi)以獲得純培(pei)養。單(dan)細胞(bao)分離(li)(li)法對(dui)操作技術有(you)比較(jiao)(jiao)(jiao)高(gao)的(de)要(yao)求。

本篇轉載于實驗之家